四、 分析蛋白質的方法(Analytic tools of proteins)
1. 聚丙烯醯胺膠體電泳(SDS Poly-acrylamide-gel-electrophoresis, SDS-PAGE)：經處理過的直線狀蛋白質鏈整體呈負電。使蛋白質分子依其分子量、電荷等因素泳動，讓不同的蛋白質分開，從而分析未知蛋白質溶液中的蛋白質成分
2. 西方墨點法(Western Blotting)：
利用特定抗體能夠專一結合其抗原蛋白質的原理來對樣品進行著色，通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息，來分析檢測特定蛋白質的生物學檢測技術。
發明者一般認為是美國史丹福大學的喬治·斯塔克（George Stark）。在尼爾·伯奈特（Neal Burnette）於1981年所著的《分析生物化學》（Analytical Biochemistry）中首次被稱為Western Blot。
資料來源：維基百科
利用特定抗體能夠專一結合其抗原蛋白質的原理來對樣品進行著色，通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中的表達情況的信息，來分析檢測特定蛋白質的生物學檢測技術。
發明者一般認為是美國史丹福大學的喬治·斯塔克（George Stark）。在尼爾·伯奈特（Neal Burnette）於1981年所著的《分析生物化學》（Analytical Biochemistry）中首次被稱為Western Blot。
資料來源：維基百科
3. 非放射性顯像方法：
A. 假設蛋白質樣品中有欲測試的目標蛋白質A存在
B. 在PVDF紙（或NC紙）加上對蛋白質A有抗原專一性的一級抗體B後將沒有被抗體吸附的其他蛋白質洗掉。
C. 加入對一級抗體B有抗體專一性並且帶有特定酵素的二級抗體
D. 該特定的酵素必須是能夠把無色的受質轉化為有顏色或螢光的產物。
E. 加入無色的受質
F. 若蛋白質樣品中存有蛋白質A則會有螢光產生，反之則無
5. 二維電泳分析法（2-D Electrophoresis）
A. 功能:可分辨出兩SAMPLE之間微小的差異
B. 為IEF（等電焦集電泳）和SDS-PAGE分析法的並用
C. IEF可分辨其PH值，SDS-PAGE可分辨其分子量大小
D. 先做IEF接著做SDS-PAGE，做出結果呈點狀分布。
E. 結果辨別：
兩者平行
|
兩者垂直
|
兩者呈斜線
| |
大小（分子量）
|
相同
|
不同
|
不同
|
不同
|
相同
|
不同
|
資料來源：維基教科書
6. 蛋白質體（Proteomics）的研究技術（舉例：正常細胞和癌細胞）
是一種微量的純化與分析技術，可以快速分離出蛋白質，並判斷此蛋白質的特性。
從一個細胞樣本中，把總體蛋白質 抽取出來，以二維電泳分析，定出所要找的目標蛋白質色點；切出此色點後，可直接在膠體中以專一性蛋白脢水解之，並以 HPLC 或毛細管電泳分離出單一胜汰片段，此一片段可用質譜儀或胺基酸定序儀分析其胺基酸序列，所得胺基酸序列由電腦資料庫中搜尋，即可判別原蛋白質的身分。
資料來源：生物技術核心實驗
兩組SAMPLE做2-D Electrophoresis-->找出其中不一樣的那一點-->利用水解酶將之水解成小胜肽-->經由HPLC或毛細管電流分析初期和別人不一樣的那一段-->1.Mass spedrum質譜儀 2.胺基酸定序儀 來分析序列-->比對電腦，即可知道癌細胞和正常細胞差別在哪一蛋白質或胺基酸
是一種微量的純化與分析技術，可以快速分離出蛋白質，並判斷此蛋白質的特性。
從一個細胞樣本中，把總體蛋白質 抽取出來，以二維電泳分析，定出所要找的目標蛋白質色點；切出此色點後，可直接在膠體中以專一性蛋白脢水解之，並以 HPLC 或毛細管電泳分離出單一胜汰片段，此一片段可用質譜儀或胺基酸定序儀分析其胺基酸序列，所得胺基酸序列由電腦資料庫中搜尋，即可判別原蛋白質的身分。
資料來源：生物技術核心實驗
兩組SAMPLE做2-D Electrophoresis-->找出其中不一樣的那一點-->利用水解酶將之水解成小胜肽-->經由HPLC或毛細管電流分析初期和別人不一樣的那一段-->1.Mass spedrum質譜儀 2.胺基酸定序儀 來分析序列-->比對電腦，即可知道癌細胞和正常細胞差別在哪一蛋白質或胺基酸
7. 毛細管電泳法(capillary electrophoresis, CE)：在進行分析時將毛細管內充滿了電解液，毛細管兩端通高壓電，使電解液內帶電分子移到毛細管相反電荷的一端。因為不同分子的大小對電荷比不同，就以不同的速率在管中移動，達到毛細管終點也有快有慢。毛細管電泳既依此探測、分離不同分子。
資料來源：維基百科
資料來源：維基百科
0 意見:
張貼留言