蛋白質水解(protein hydrolysis)

蛋白質的鑑定：
蛋白質的一級結構就決定了蛋白質的三級或四級結構。再切成胜肽片段進行定序

構成力量：	共價鍵	非共價鍵	變性條件
一級構造	胜肽鍵	-	強酸水解
二級構造	-	氫鍵	尿素、加熱
三級構造	雙硫鍵	四種二級鍵	mercaptoethanol, SDS, 加熱
四級構造	-	四種二級鍵	SDS, 加熱

 資料來源：國立臺灣大學

1.蛋白質水解
A.破壞一級結構：利用不同的試劑將多肽鍊切割成斷點小胜片段， 不同的試劑將多肽鍊切割成斷點小胜片段， 然後利用各個片 然後利用各個片段「重複」的部分進行比較，便可得知序列先後
a.酵素法


胰凝乳蛋白酶切割機制
資料來源：維基百科

切割位置	蛋白酶	方法
Phe、Tyr、Trp (C端)	胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)	酵素法
Lys、Arg (C端)	胰蛋白酶(trypsin)	酵素法
切Tyr、Phe、Trp(N端)	胃蛋白酶(Pepsin)	酵素法
Met (C端)	溴化氫CNBr cyanogens bromide	化學法
全面切斷	6N HCl	化學法

b.化學法

B.破壞三級與四級結構：SDS(十二烷基硫酸鈉)，SDS為界面活性劑會破壞蛋白質的三級與四級結構使其變性，並包覆變性蛋白質，使其帶有一致的負電荷（大約每兩個胺基酸一個SDS）和一致的形狀（長條形）。


資料來源：維基百科
C.破壞三級結構：見下表

方法	氧化性裂解	還原性裂解
試劑	過甲（蟻）酸 （performic acid）	β-巰基乙醇（β-mercaptoethanol,β-ME）
產物	含胱胺酸殘基（cysteicacid residues）的胜肽	含半胱胺酸殘基（cysteinyl residues）的胜肽