NAD和NADP之活性分析

1. 介紹：

A. NAD（Nicotinamide adenine dinucleotide）及NADP（Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate）皆來自於煙酸（Naicin）維生素B3[vit B3]，且都參與氧化還原反應，並被脫氫酶（dehydrogenases）催化，本身也是輔酶（Coenzymes）

B. 就結構來說，NAD+和NADP+也很相似，兩者唯一差別只有在腺嘌呤核醣（adenine ribose）的2號碳上，NADP+多了一個磷酸根

2. 測量酵素活性之運用： 下圖是一個偶連反應（Couple reaction，反應為連貫不間斷的），當Glucose被Hexokinase催化成為Glucose 6-phosphate，又繼續被Glucose 6-phosphate Dehydrogenases催化成6-Phosphogluconolactone。其中，NADP+扮演Glucose 6-phosphate Dehydrogenases的輔酶，我們可以藉由NADP+的消耗量或NADPH的生成量來判斷此酵素的催化活性。又因整個反應屬於偶連反應，故NADP+的消耗量或NADPH的生成量同時也可拿來判斷Hexokinase（前一段反應的酵素）的催化活性


需要NADP+扮演Glucose 6-phosphate Dehydrogenases的輔酶

 


Glucose 6-phosphate     6-Phosphogluconolactone
資料來源：維基百科

3. 吸光性：

A. 結構改變造成吸光改變： 如下圖，因NAD+和NADP+具有許多苯環和雙鍵，故它們最大吸光量在波長260Å，在紫外光的照射下，會產生結構變化，苯環的共振結構被破壞，與H+ +2e- →H- 鍵結，分別變成NADH 與NADPH，而產生的新結構則對UV340較為敏感

B. 吸光性改變來計算酵素活性： 將上述現象畫成圖，其中實線為吸光反應前（高峰落在UV260），虛線則是反應後（高峰落在UV340），即是下圖。透過下圖可以計算NADP+、 NAD+、NADPH、NADH反應變化量，來推估酵素活性

NAD+ (blue line) and NADH (red line)

資料來源：BMG實驗室科技

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