NAD和NADP之活性分析

1. 介紹:
A. NADNicotinamide adenine dinucleotide)及NADPNicotinamide adenine dinucleotide phosphate)皆來自於煙酸(Naicin)維生素B3[vit B3],且都參與氧化還原反應,並被脫氫酶(dehydrogenases)催化,本身也是輔酶(Coenzymes
B. 就結構來說,NAD+NADP+也很相似,兩者唯一差別只有在腺嘌呤核醣(adenine ribose)的2號碳上,NADP+多了一個磷酸根
2. 測量酵素活性之運用: 下圖是一個偶連反應(Couple reaction,反應為連貫不間斷的),當GlucoseHexokinase催化成為Glucose 6-phosphate,又繼續被Glucose 6-phosphate Dehydrogenases催化成6-Phosphogluconolactone。其中,NADP+扮演Glucose 6-phosphate Dehydrogenases的輔酶,我們可以藉由NADP+的消耗量或NADPH的生成量來判斷此酵素的催化活性。又因整個反應屬於偶連反應,故NADP+的消耗量或NADPH的生成量同時也可拿來判斷Hexokinase(前一段反應的酵素)的催化活性


需要NADP+扮演Glucose 6-phosphate Dehydrogenases的輔酶


 



Glucose 6-phosphate     6-Phosphogluconolactone
資料來源:維基百科
3. 吸光性:
A. 結構改變造成吸光改變: 如下圖,因NAD+NADP+具有許多苯環和雙鍵,故它們最大吸光量在波長260Å,在紫外光的照射下,會產生結構變化,苯環的共振結構被破壞,與H+2e→H鍵結,分別變成NADH NADPH,而產生的新結構則對UV340較為敏感
B. 吸光性改變來計算酵素活性: 將上述現象畫成圖,其中實線為吸光反應前(高峰落在UV260),虛線則是反應後(高峰落在UV340),即是下圖。透過下圖可以計算NADP+、 NAD+NADPHNADH反應變化量,來推估酵素活性
NAD+ (blue line) and NADH (red line)

資料來源:BMG實驗室科技

▼酵素(enzyme) 顯示/隱藏(show/hide)

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