胺基酸定序(amino acid sequencing)

一、N端切除
1.Edman降解法(Edman degradation):用於30-40胺基酸的短胜肽序列


資料來源:維基百科


2.Aminopeptidase的水解(Hydrolysis with aminopeptidases):胜肽用leucine aminopeptidase或aminopeptidaseM部分水解,所釋出的胺基酸作動力分析,便可推斷出胜肽部分順序。這些酵素能催化胺基末端胜肽鍵的水解,並釋出游離的胺基酸,水解由一胺基酸到另一胺基酸依序進行。


資料來源:sciencedirect

3.Dansyl-Edman步驟(Dansyl-Edman procedure):Gray和Hartley發展了一種高靈敏的胺基末端尾基的方法,以控制Edman切割的進行,這種方法叫”dansyl”法。

4.Sanger’s法(Sanger’s method):使用2,4-二硝基氟苯(DNFB)與第一級胺基(以及支鏈的酚基、硫醇基、密唑基)以Schotten-Bauman方式反應。胺基末端的二硝基酚衍生物(DNP-胜肽),在酸水解的情況下很穩定,胜肽衍生物完全水解後,DNP-胺基酸便釋放出來。

二、C端切除
1.羧基末端方法(Carboxyl-terminal methods):最常用作蛋白質的羧基末端的化學鑑定法,就是井分解(hydrazindysis)。樣品溶於無水的井化物(hydrazide),混合物在一百度下保持二十小時。羧基末端胺基酸便以游離胺基酸釋出;所有其他蛋白質中的胺基酸,都以強鹼性胺基酸井化物存在。


資料來源:ABRF

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