Dansyl-Edman步驟(Dansyl-Edman procedure)


Gray和Hartley發展了一種高靈敏的胺基末端尾基的方法,以控制Edman切割的進行,這種方法叫”dansyl”法。胜肽樣品分佈於一系列的試管中,一根試管對一胺基酸。對所有樣品作順序的Edman切割,一步驟之後,便移出一樣品以便作尾基分析。胜肽的順序,是從完整胜肽的胺基末端,與各切割之後的胜肽胺基酸間建立起來的。

胺基末端的分析是用氯化1-二甲基胺基柰-5-磺酸(1-dimethyl-aminonaphthalene-5-Sulfonyl chloride)(dansyl chloride, DNS-Cl)。此法類似Sanger的DNFB法,DNS-Cl與胜肽反應,生成對酸穩定的游離胺基酸磺酸醯胺衍生物(sulfonamide derivative)。

DNS-胜肽用6N HCl水解生成游離胺基酸,和胺基末端胺基酸的磺酸醯胺衍生物,胺基酸衍生物再用濾紙電泳法或薄層色層分析法。Dansyl胺基酸用紫外線照射,出現螢光點而偵測出來,偵測的範圍在10-4到10-5微莫耳,所以Edman分析步驟的靈敏度,高達5到10的10-9莫耳的胜肽樣品。
資料來源:輔仁大學

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