1945年，Sanger成功發展了蛋白質或胜肽的胺基末端決定方法。他使用2,4-二硝基氟苯(DNFB)與第一級胺基（以及支鏈的酚基、硫醇基、密唑基）以Schotten-Bauman方式反應。胺基末端的二硝基酚衍生物(DNP-胜肽)，在酸水解的情況下很穩定，胜肽衍生物完全水解後，DNP-胺基酸便釋放出來。
DNP-胺基酸可用諸如醚類的有機溶劑，從其餘的胺基酸中萃取出來。DNP-胺基酸的鑑定，是根據它與已知DNP-胺基酸的濾紙色層分析對照得知，DNP-胺基酸是黃色化合物，因此，其產量可在純樣品的鹼性溶液中，以360nm的波長作分光測量而估得。
雖然這種方法只限於胺基末端胺基酸的鑑定，但在蛋白質、胜肽及蛋白質的亞單位上，已足以獲得相當有用的資料。Sanger在胰島素分子的研究上，發現DNP-胰島素水解物中，有等量的DNP-glycine與DNP-phenylalanine。此事實指出胰島素分子有兩條聚肽鏈。
如果DNP-蛋白質（或DNP-胜肽）受到酸的水解，則會形成小DNP-胜肽及游離胺基酸的混合物。DNP-胜肽的組成可用來鑑定連接於胺基末端的胺基酸。例如，我們得知DNP-ala, DNP-ala (tyr), DNP-ala (tyr, ala)，便可明確地建立Ala-Tyr-Ala的順序。從DNP-胜肽的組成，可推斷四個到五個胺基酸的順序。
資料來源：輔仁大學
▼胺基酸應用(amino acid application)
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