酵素連結免疫吸附分析法(ELISA, enzyme-linked immunoadsorbent assay)

酵素連結免疫分析法已日益普及，因為非常靈敏且不必如免疫螢光術和放射免疫分析法需要特殊設備。此法的原理是以一種酵素連結到抗原或抗體上，用酵素活性來做為定量標記。有許多方法已經架構完成，視使用的酵素性質及待測的抗原-抗體系統而定。其中廣泛使用的便是酵素連結免疫吸附分析法（enzyme-linked immunosorbent assay；ELISA），可以測定抗原或抗體。
ELISA適用於許多病毒的診斷及確認。
資料來源：talung

♛舉例（辨識HIV的存在）

a. 準備一級抗體、二級抗體

Ÿ 一級抗體：可專一辨識HIV上的envelope protein

Ÿ 二級抗體：可辨識一級抗體恆定區，且攜帶有酵素Horseradish peroxidase

b. 置入檢體與一級抗體後清洗一次，如有HIV時，一級抗體就會附著上

c. 置入二級抗體並清洗一次，如有HIV，二級抗體就會附著在一級抗體

d. 放入無色的被催化物，若有二級抗體存在，就會被酵素催化成有色的產物，即可得知HIV病毒的存在


資料來源：維基百科
首先，必須先製造針對外來轉殖基因所表現的蛋白質具專一性的抗體，稱為一次抗體（或偵測抗體，detection antibody）。檢測時，先將待測檢體蛋白質固定在一個介面上（非專一性的結合），加入一次抗體來偵測捕捉特定蛋白質，再加入另一個與酵素結合並且對一次抗體有專一性之二次抗體（或稱酵素連結抗體，enzyme-labeled antibody），二次抗體與一次抗體產生專一性結合並藉此將酵素也帶到有蛋白質存在的位置，然後加入酵素的受質（substrate），經過一段時間的作用，酵素會催化受質反應而呈現顏色或產生螢光，最後在介面上特定位置若有呈色或螢光保留，即表示有該蛋白質存在。
資料來源：食品藥物消費者知識服務網

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